在做ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，難免會(huì)遇到各種不同的問(wèn)題，比如標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)不好，試劑盒的回收率，假陰性，假陽(yáng)性，實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性不好等等?，F(xiàn)在就來(lái)一一解答用戶(hù)們?cè)趯?shí)驗(yàn)過(guò)程中遇到的各種疑問(wèn)！
ELISA試劑盒曲線(xiàn)問(wèn)題：
1.OD值不正常
試劑盒未回溫，試劑盒回溫到25℃
溫度控制不好，控制正確溫度
孵育時(shí)間不準(zhǔn)確，控制孵育時(shí)間
洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、洗滌次數(shù)增 加，洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干
陽(yáng)光直射，對(duì)著風(fēng)直接吹，避風(fēng)避
酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)錯(cuò)誤，酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)450nm
抗體的稀釋錯(cuò)誤，正確的稀釋抗體
水質(zhì)問(wèn)題，用娃哈哈礦泉水代替
2.白 板
洗滌液配制錯(cuò)誤，正確的配制洗滌液
少加液體（錯(cuò)加液體），正確的步驟加液體
3.無(wú) 梯 度
標(biāo)準(zhǔn)品也污染，換標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)板
OD值不正常，控制溫度時(shí)間在做一次
人為點(diǎn)板，不要點(diǎn)板
4.線(xiàn) 性 不 好
OD值不正常，控制溫度時(shí)間在做一次
ELISA試劑盒回收率
1.空白管陽(yáng)性高
樣本本身就是陽(yáng)性樣本，換陰性樣本做回收率
空白管在實(shí)驗(yàn)中被污染，實(shí)驗(yàn)中防止交叉污染
水質(zhì)原因用，娃哈哈礦泉水代替
2.偏 高
添加量不準(zhǔn)確，的添加量
添加濃度不適合，添加合適的濃度
取液吹干量多，準(zhǔn)確的取液吹干
取到其它相層液體，取需用相吹干
復(fù)溶液未稀釋或加入量少，正確的稀釋復(fù)溶液
3.偏 低
添加量不準(zhǔn)確，的添加量
添加濃度不適合，添加合適的濃度
取液吹干量少，準(zhǔn)確的取液吹干
復(fù)溶液稀釋錯(cuò)誤或加入量多，正確的稀釋復(fù)溶液
假陰、陽(yáng)性
1，水質(zhì)原因：點(diǎn)復(fù)溶液驗(yàn)證，用娃哈哈礦泉水代替
2，實(shí)驗(yàn)操作原因
吸取到其它相吹干，準(zhǔn)確的取液吹干
離心不*，延長(zhǎng)離心時(shí)間
樣本的污染，更換樣本
乳化未處理*，溫?。?0℃）處理乳化現(xiàn)象
3，儀器試劑原因
離心管未清洗干凈，ELISA試劑盒正確的洗滌器具
有機(jī)溶劑的影響，做試劑空白看影響結(jié)果
4，衍生化試劑原因（長(zhǎng)時(shí)間衍生化試劑變質(zhì)）,更換衍生化試劑
5，與曲線(xiàn)好壞相關(guān),，保證曲線(xiàn)的正常
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